猪恶性水肿确诊方法 猪水肿病特征

　　（一）细菌学检查

　　1．病料采纳生前可于部分穿刺采纳水肿液。身后除采纳部分水肿液及坏死安排外，还要采纳肝、脾、肾、肺及汗水，尤以肺脏含菌较多。

　　2．涂片、镜检将水肿液、汗水、脏器等制作涂片，肝脏外表作触片，天然枯燥、火焰固定后，用革兰染色法染色镜检。

　　本菌是在肝外表及浆膜触片染色标本中，菌体构成微曲折的长丝状，这一形态特征在确诊上具有很重要的意义。芽孢较菌体大，呈卵圆形，坐落菌体中心或近端。能运动，无荚膜，革兰染色阳性。

　　3．细菌别离培育 采纳部分水肿液或尸身的肝脏安排，放于肝片肉汤中，置37℃恒温箱中培育，24h肝片肉汤出现混浊，有沉积。经3-4d后，取沉积物0.1 - 0.5mL，接于肝片肉汤中，于80℃温水中30min后取出，冷却后置于37℃温箱中培育，待充沛发育后使用一般琼脂斜面培育，经证实无需氧菌稠浊时，使用血液葡萄糖琼脂平板进行厌氧别离培育，当见有呈弯曲长丝状、柔嫩花边样菌落，并有溶血环时，能够开始认为是糜烂梭菌。

　　4．动物感染实验 取部分水肿液或尸身肝脏安排制成5-10倍悬液，或用肝片肉汤培育物0.1-0.2mL，接种于豚鼠股部肌肉，18-24h豚鼠逝世，打针部位发作严峻出血性水肿，肌肉湿润，呈鲜红色，部分水肿液涂片镜检，发现有两端钝圆的大杆菌。肝外表触片镜检，见有长丝状大杆菌时，即可确诊。

　　5．荧光抗体染色法（直接法） 取肝脏外表触片数张，先用丙酮固定10min，再经磷酸盐缓冲液浸洗2 - 3min后，放人事先垫有浸湿滤纸，并在恒温箱内预热至3 7℃的大培育皿中，再滴加糜烂梭菌的荧光抗体数滴于标本片上，盖上皿盖，作用30min，取出，将标本片先后在两个盛有磷酸盐缓冲液的小缸内各浸洗5 - 7min，干后滴缓冲甘油（无水甘油9份，缓冲液1份）1滴，盖上盖玻片，于荧光显微镜下查看，如见有艳丽的黄绿色无关节长丝状菌体，即可确诊。

　　取病料，然后接种于肉肝汤，在3 7 ℃厌氧培育24- 48h，纯化后进行牛乳发酵实验来鉴定产气荚膜梭菌，牛乳培育基的“猛烈发酵”是产气荚膜梭菌最杰出的生化特性，肉肝汤中5 - 6h即呈均匀污浊，并发生很多气体，接种培育于牛乳培育基中8- 10h后，牛乳即被酸凝结，同时发生很多气体，使凝块变成多孔的海绵状，严峻时被冲成数段，乃至喷出管外。糜烂梭菌在牛乳中产酸、产气，缓慢凝结牛乳。